Содержание

Количественный пцр на гепатит в расшифровка

ПЦР на гепатит B

Наличие современных препаратов против гепатита B (HBV) с четкими показаниями для их назначения требует точной и быстрой верификации диагноза. Однако ввиду скудных клинических данных на первых неделях болезни и ограниченности иммуноферментных методов анализа, скорость постановки диагноза снижается.

Присутствие маркеров анти-HBc IgM, HBsAg, анти-HBc, HBeAg, анти-HBe позволяют подтвердить HBV или установить факт перенесенной болезни. Но определить присутствие активных вирусных частиц в крови и посчитать их число на момент проведения исследования можно посредством ПЦР — количественного real-time теста по выявлению гепатита B. Метод, в сравнении с иммуноферментными способами диагностики, решает диагностические проблемы и позволяет прогнозировать течение болезни на фоне приема противовирусных препаратов.

Основы диагностики заболевания

Диагностика гепатита B основывается на оценке клинических проявлений, иммуноферментных и инструментальных методов исследований. Заболевание протекает в острой фазе после инкубационного периода и, в зависимости от дозы инфекции и эффективности лечения, переходит в хроническую стадию. Главной целью лечения остается предотвращение хронизации, то есть элиминация всех вирусных частиц из крови. Клиническая норма течения болезни — излечение без последующей виремии.

Факт устранения инфекции необходимо доказать количественным методом исследования.

Поскольку любой качественный иммуноферментный анализ позволяет диагностировать HBV косвенно, то есть не показывают наличие возбудителя во внутренней среде организма, а характеризует иммунный ответ на инфекцию, то контроль эффективности терапии и факт излечения становится труднодоказуемыми. Потому пациенту с гепатитом B или с наличием диагностических критериев в его пользу должна проводиться полимеразная цепная реакция с целью количественного определения числа вирусных частиц в крови. Диагностическая норма — это отсутствие копий ДНК инфекта.

Описание диагностического метода

Высокочувствительный метод ПЦР-диагностики гепатита В относится к категории генно-инженерных молекулярно-биологических исследований. Посредством него определяется количество вирусной ДНК в биологическом материале пациента и допустимая норма. По полученным результатам устанавливается число вирусных частиц в единице объема. Материалом для диагностического теста является венозная кровь пациента. Забор желателен натощак из-за возможного влияния хилезной сыворотки на результат исследования.

Полученные результаты необходимо предоставить врачу для интерпретации и определения дальнейшей тактики. Самостоятельная расшифровка не представляет диагностической ценности.

Значимость результата числа вирусных частиц, полученного метода ПЦР, превышает значение иммуноферментных исследований. Поскольку анализ в режиме real-time показывает присутствие возбудителя заболевания в крови, его информативность выше прочих. Если ИФА свидетельствуют только о наличии антител, что наблюдается с 4-х недель инкубационного периода и сохраняется более 8 недель после элиминации вируса из крови, то полимеразная цепная реакция однозначно подтверждает активное течение заболевания или его излечение, характеризует динамику назначенной терапии.

Полимеразная цепная реакция с количественным определением частиц возбудителя решает диагностические вопросы в пользу прекращения лечения в связи с выздоровлением или продолжения терапии из-за ее недостаточной эффективности. Метод максимально специфичен в отношении вируса HBV и отличается приемлемой погрешностью.

Показания и цели выполнения

Количественный анализ гепатита B является наиболее достоверным и позволяет подтвердить данные, полученные иммуноферментными методами. Он назначается при:

  1. получении положительного диагностического результата ИФА;
  2. лечении пациента с установленным диагнозом вирусного поражения печени;
  3. при диагностике гепатитов смешанной этиологии;
  4. при необходимости определения вирусной нагрузки у пациента.

Поскольку более широко в практике инфекциониста применяется метод иммуноферментного анализа, то часть пациентов с легким течением болезни можно лечить и не прибегая к необходимости подсчета вирусной нагрузки. Но ПЦР общепринято считается «золотым стандартом» диагностики в гепатологии, так как из-за однозначности своего результата снимает ряд организационных вопросов. Поэтому направление пациента на количественный анализ преследует следующие цели:

  • получение данных о числе вирусных частиц в крови пациента;
  • подтверждение острого течения гепатита и своевременной верификации хронизации заболевания;
  • постоянное выявление латентных вирусоносителей с положительными ИФА-тестами, мониторинг их виремии;
  • принятие решения о назначении антивирусного лечения, его комбинирования и прекращения.

Наиболее значимой целью применения количественного ПЦР-теста на выявление HBV является определение возможных комбинаций лечения. В случаях с высокой вирусной нагрузкой результат анализа дает специалисту возможность приступить к комбинированию препаратов. В ходе терапии на основании результата ПЦР легко определить эффективность назначенного фармакологического лечения. Руководствуясь только данными иммуноферментных методов, нельзя своевременно определить факт излечения и его текущую эффективность. Поэтому количественный real-time тест — необходимый анализ перед началом лечения острого гепатита, латентного вирусоносительства с высокой виремией и хронического HBV.

Интерпретация результатов количественного ПЦР-теста

Расшифровка результатов количественного ПЦР-теста должна проводиться лечащим врачом пациента. Необходимо дать оценку диагностического показателя и определить терапевтическую тактику.

Стандартный анализатор способен выдавать количественный показатель, который отражает число копий вирусной ДНК, присутствующих в исследуемой венозной крови. Единицы измерения — копии/мл, МЕ/мл (копии на миллилитр, международные единицы на миллилитр). Расшифровка результатов приведена в таблице с указанием разных единиц измерения.

Количественный анализ на вирус гепатита С: расшифровка результатов

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Что такое ПЦР

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Читать еще:  Гороховый суп можно при гастрите

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Виды исследования

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Особенности количественного анализа

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Нам каких этапах заболевания проводится

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Как подготовиться к исследованию

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

Необходимо:

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Расшифровка анализа крови на гепатит В

В медицинском мире заболевание гепатита В считается одним из самых опасных в наши дни.

Данный вирус способен передавать при контакте с кровью зараженного – это могут быть ножницы для кутикулы в маникюрном салоне, медицинские инструменты, в частности инструменты дантистов, которые не прошли необходимую стерилизацию, или она была выполнена не надежным путем. Кроме того, вирус передается половым путем.

Для того, чтобы констатировать заболевание на гепатит В, у пациента необходимо взять кровь на анализ.

Как было описано выше, вирус может передаваться половым, бытовым путем, он относится к гематогенному типу распространения. При заражении вирус попадает в клетки печени, и оттуда начинает распространяться по всему организму. Вирус разносится через кровеносную систему, он крайне стойкий к перепадам температуры и сохраняет свою способность, вредить живим клеткам.

Какие анализы крови сдают при гепатите В

В том случае, когда человек ощутил первые симптомы заболевания гепатит В, следует немедленно обратится к доктору и сдать анализы. При исследовании у больного берут кровь, чтобы ее протестировать. Кровь берут натощак, последний прием пищи должен быть не меньше 8 часов назад.

Чтобы установить наличие заболевания в организме человека, необходимо сделать три типа анализа крови:

  • Полимеразная цепная реакция покажет, имеется ли в клетках ДНК НВ V;
  • Исследуют наличие белка и антигена в крови пациента;
  • Анализы о наличии белка укажут на обострение заболевания.

Доктора очень часто проводят клинические анализы по нескольким маркерам для того, чтобы установить полную картину заболевания.

Иммунологические тесты на гепатит В

В данный период времени достоверными являются иммунологические анализы на гепатит В. Анализы нацелены на то, чтобы выявить в крови антитела, образовавшиеся в печени. Обычно проверка на гепатит В затрагивает расшифровку собранных данных отдельных клеток белка. Во время пробы обращают внимание на такие антитела:

  • HBsAg – их часто можно встретить в начале заражения, еще до того, как болезнь даст о себе знать. Положительный маркер указывает на то, что человека инфицирован, хотя были случаи положительного результата у совершенно здорового человека. Результаты негативны в том случае, когда в организме пациента насчитываться не больше 0.05 МЕ/мл, при большей концентрации антител – анализ положительный.
  • HBeAg – данные антитела имеются почти у всех зараженных пациентов. При длительной высокой концентрации антител в крови, происходит переход заболевания в хроническую форму. Маркер положительный означает обострение заболевания. Наличие вышеупомянутого антитела в организме пациента, говорит о том, что болезнь прогрессирует и выходит на пик.
  • Anti-НВс имеет два типа антител – это l gGи lgM. Наличие в крови антитела lgM говорит о том, что болезнь подходит к своей высшей точке и способна перейти в хроническую форму. Доктора должны следить за тем, что данное антитело не увеличило свои показатели в крови. К счастью lgG – это хорошо, означает образование иммунитета на вирус гепатита В.
  • Anti-НВе – антитело говорит о том, что заболевание протекает нормальным путем и в организме пациента формируется иммунитет к гепатиту В.
  • Anti-HBs – это означает, что пациент здоров и его иммунная система значительно окрепла.
Читать еще:  Можно ли есть при болезни печени

Выявление ДНК HBV методом ПЦР

Для клинического исследование, которое поможет определит заражен ли пациент вирусом гепатита В, выбирают метод ПРЦ. Аббревиатура ПЦР означает полимеразная цепная реакция, путем ее изучения можно определить наличие вируса в организме.

Результаты исследования помогают определить наличие генного возбудителя в клетках печени. При правильном проведении процедуры – результаты считаются достоверными.

  • Качественное ПРЦ – положительный или отрицательный результат. Данная процедура обязательна для всех пациентов с подозрением на заражение гепатитом В. В том случае, когда в клетках ДНК вирус находится в маленьком количестве, он не будет обнаружен.
  • Количественное ПРЦ. Данное исследование покажет не только, наличие или отсутствие вируса, но и стадию его заражения. Благодаря определению стадии заболевания можно назначить необходимый курс лечебной терапии.

Кроме всего прочего ПРЦ помогает точно назначить лечение и даже корректировать дозировку лекарственных препаратов. Определяется также длительность лечебной терапии, в некоторых случаях ее можно прекратить раньше времени, а другим пациентам требуется дополнительной курс реабилитации.

Биохимический анализ крови при гепатите В

Для того, чтобы составить всю картинку заражения и протекания заболевания необходимо сделать биохимический анализ крови. Данное исследование, поможет установить, в каком состоянии находятся внутренние органы пациента и как они функционируют. Анализы дают общую картину метаболических процессов в организме, а также говорит о скорости обмена веществ.

Биохимический анализ также укажет на все витамины и микроэлементы, которые необходимы для нормальной борьбы организма с заболеванием и для укрепления иммунной системы.

Анализы на гепатит В можно сдать в любой клинике, частной или государственной. При выявлении вируса гепатита В в организме человека, путем биохимического анализа, имеются такие составляемые.

Количественный анализ фермента АЛТ (АлАт)

Данный фермент можно встретить в большой концентрации, при отрой или хронической форме инфицирования вирусом гепатита В. Фермент находится в клетках печени, а благодаря кровотоку распространяется по всем сосудам.

Концентрация вещества в организме постоянно меняется из-за чего, следует проводить анализы раз в квартал. Благодаря АЛТ можно исследовать не только активность вируса, но и оценить масштабы его негативного влияния на печень и организм в целом.

Количественный анализ на АСТ-фермент

Белок – это одно из самых главных веществ в организме человека, из него строятся все жизненно важные органы, в том числе и сердце. При заболевании гепатитом В большой показатель АСТ, говорит о фиброзе печени.

Высокие показатели указывают на разрушение клеток печени. Для окончательного диагноза следует учесть соотношение АСТ и АЛТ. При высокой концентрации обоих ферментов, развивается некроз печени.

Гемоглобин расщепляется в тканях печени и селезенки, благодаря этому появляется такое вещество как билирубин. Именно данный компонент является основой желчи. Билирубин может быть прямой и непрямой. При высокой концентрации прямого билирубина в крови, можно установить заражение гепатитом В или другими заболеваниями печени.

Высокая концентрация не прямого билирубина в крови говорит о синдроме Жильбера. Кроме того, большая концентрация любого билирубина сигнализирует о плохой проходимости желчных протоков. При заражении гепатитом моча становится темной, лицо и белки глаз приобретают желтый цвет.

Альбумин – это белок, который синтезируется в печени. При низком показатели данного белка в организме происходит поражение клеток печени.

Общий белок

Снижение концентрации общего белка в организме пациента говорит о нарушение работы печени.

Данный фермент доктора используют, чтобы выявить желтуху или холецистит. Повышенный уровень ГГТ говорит о токсическом поражении клеток печени, которое может произойти вследствие хронического алкоголизма или отравления медикаментами. Белок крайне чувствителен к алкоголю и токсинам и при их избыточном количестве, активность белка увеличивается.

В печени происходит белковый обмен, а продукт данного обмена в медицине называют креатинином. При понижении уровня креатинина замедляется работа печени.

Белковые фракции

Низкий уровень белковых фракций говорит о явных нарушениях в работе печени.

Расшифровка анализа на гепатит В и значения в норме

Для диагностики вируса необходимо провести целый ряд различных исследований. Результаты всех анализов в комплексе дадут четкую картину заболевания.

Виды ПЦР на гепатит В и расшифровка результатов

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

  • отрицательный результат — вируса нет;
  • положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

  1. Перед назначением лечения.
  2. Для оценки эффективности терапии.
  3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
  4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

  • 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

  • ДНК ВГВ 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

  1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
  2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
  3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.
Читать еще:  Кто является носителем гепатита с

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

Все о количественном анализе на гепатит B

Гепатит B – вирусная инфекция, поражающая печень. Сегодня около 300 млн человек по всему миру являются носителями гепатита B.

У некоторых вирус переходит в цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному (первая стадия рака). Новые противовирусные стратегии исследования болезни имеют две задачи:

  • определить, насколько организм чувствителен к вирусной нагрузке;
  • определить, насколько вирус устойчив к приему лекарств и других медицинских вмешательств.

Особенности исследований на гепатит

Серологические исследования направлены на выявление в сыворотке крови антигенов и антител, но этот метод ненадежен. Поэтому ученые разработали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Он позволяет не только качественно определить наличие вируса (есть или нет), но и количественно (в каком количестве присутствуют антитела в сыворотке крови).

Перед сбором крови врач должен выяснить:

  • принимал ли пациент наркотические вещества внутривенно;
  • являлся ли человек донором либо реципиентом (кому вливали кровь);
  • проводились ли больному хирургические вмешательства;
  • повреждался ли у пациента кожный покров;
  • уверен ли человек в здоровье своего сексуального партнера;
  • были ли контакты с зараженными вирусом гепатита B.

При остром гепатите положительный результат можно выявить через 1-2 недели после инкубации путем ПЦР.

Анализы крови для выявления вирусного гепатита В (ВГВ) берутся при:

  • Диагностике острого гепатита в:
    • период инкубации (1-2 недели);
    • интенсивный период недуга (3-4 недели);
    • период ранней стадии выздоровления.
  • Диагностике ХВГ (хронического вирусного гепатита).
  • При микс-гепатитах.

Также регулярно анализы берутся у людей, находящихся в группе риска, к ним относят:

  • людей, нуждающихся в частых переливаниях крови;
  • пациентов, проходящих постоянные процедуры очищения крови при почечной недостаточности;
  • людей, больных СПИДом или ВИЧ-инфекцией;
  • беременных женщин;
  • медицинских работников, контактирующих с кровью;
  • больных с симптомами заболевания печени.
  • лечащихся от цирроза, рака и других заболеваний печени.

Подготовка к количественному анализу предполагает соблюдение таких правил:

  • не курить за 1 час до сдачи анализа;
  • не есть за 4 часа до процедуры;
  • лучше всего количественный анализ сдавать после сдачи качественного;
  • не пить алкоголь за сутки до исследования.

Эффективная терапия при заболевании влияет на уменьшение количества ДНК вируса в сыворотке. Через полгода после старта лечения количество вируса должно уменьшиться на 2-3 порядка. Если результаты анализов через время не изменились, или, наоборот, стали хуже, то в обязательном порядке меняется вся терапия, и автоматически острый гепатит переименовывается в хронический.

При попадании ДНК вируса гепатита в организм инфекция может пойти 2путями:

  • репликативным (происходит развитие острого либо хронического гепатита, что в дальнейшем, без медицинского вмешательства, ведет к циррозу печени);
  • интегративным (развитие бессимптомного, неактивного вирусоносительства, которое все-таки приведет к циррозу либо гепатоцеллюлярной карциноме).

Как происходит процедура забора крови? Врач стягивает предплечье больного жгутом и вводит иглу в вену на локтевом сгибе, после забирает кровь в шприц и переливает в специальную пробирку. Результаты будут готовы через несколько дней, срок зависит от места, где пациент сдает анализ.

Материалом служит сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты, которые помещают в пробирку с хорошо завинчивающейся крышкой. Но на результат может повлиять загрязненный материал для забора анализа, передержка материала (он хранится до 24 часов при температуре не более +4 °С).

Методы количественного анализа

Существует несколько способов количественного анализа, среди которых ПЦР, ИФА, биохимия.

ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Это анализ на поверхностный антиген-белок, который составляет часть внешней оболочки вируса. После того, как вирусные частицы попали внутрь организма, они начинают интенсивное размножение на поверхности печени, уничтожая здоровые клетки органа. Новые молекулы выбрасываются в кровь.

Исходя из этого, исследуют уровень концентрации в сыворотке антител и определяют, есть заражение гепатитом B или нет.

Материал для исследования берется натощак. ПЦР проводится в аппарате под названием амплификатор.

Алгоритм анализа ПЦР:

  1. Сначала расщепляют ДНК на 2 самостоятельные цепочки с помощью повышения температуры материала для исследования в амплификаторе.
  2. Материал немного охлаждают с помощью азота. Праймеры находят нужные последовательности в молекуле ДНК и присоединяются к ним.
  3. Элонгация – третий шаг, когда два праймера присоединяются к двум цепочкам ДНК. При помощи фермента ДНК-полимеразы происходит достраивание участка ДНК от присоединившегося к нему ранее праймера. Таким образом, на участке в области праймеров в каждой из цепочек ДНК образуется вторая комплементарная цепочка ДНК.

В дальнейшем эти шаги повторяются множество раз, и за несколько часов выполняется 35-45 циклов, образуются миллиарды копий искомого образца. Если такие копии есть, то высчитывается их количество на 1 мл материала для анализа.

Помимо ПЦР, существует метод ИФА (иммуноферментного анализа). Он определяет не только поверхностные антитела, но и расположенные внутри и взаимосвязанные с предыдущими антигенами, а также их количество.

Еще один метод количественного анализа. При попадании вируса из поврежденных клеток печени в организм выбрасываются ферменты, если их количество больше нормы, то можно говорить о заражении. Кроме того, нужно определить вирусную нагрузку (ДНК-HBV), сдать печеночные пробы (на билирубин с фракциями, АЛТ, АСТ, щелочную фосфатазу, гамму-ГТ). Обязательным является посещение инфекциониста, который при необходимости направляет больного на фиброэластометрию, подбирает курс лечения.

Биохимия — количественного анализ

ПЦР в реальном времени

В этом методе поиск копий происходит после каждого цикла, а не после 35-45, Метод работает так же, как и ПЦР, позволяет определять количество копий в образце для исследований. Тем самым время проведения анализа заметно сокращается, при этом гарантирован 100 % результат.

Обнаружение ДНК гепатита B

Установление количества ДНК гепатита B очень важно, так как при малом показателе прогноз болезни более благоприятный, чем при большем. Концентрацию ДНК ВГВ измеряют в копий/мл либо me/мл

1 me/мл = 2,83×10 копий/мл

Результаты данного анализа могут быть следующими:

  • ДНК вируса не обнаружена, если его нет в организме либо концентрация очень мала, 90 me/мл = 200 копий/мл;
  • ДНК вируса обнаружена в количестве ниже нормы концентрации, 2×106 копий/мл;
  • ДНК вируса находится в среднем количестве, при 2×106-2×109 копий/мл;
  • ДНК вируса больше 2×109 копий/мл, концентрация антител высокая, что говорит о прогрессе заболевания.

Если результат анализа положительный, то диагностируется:

  • носительство вируса гепатита B;
  • заболевание хроническим гепатитом;
  • заболевание острым гепатитом B.

Если результат отрицательный, то:

  • вируса в организме нет;
  • возможно наличие гепатита B в период выздоровления (если предыдущие анализы являлись положительными).

В редких случаях отрицательный результат анализа на ДНК вируса гепатита B говорит о быстром и злокачественном течении болезни.

Решение о сдаче анализа на вирус принимает:

Количественный анализ является обязательным при диагностике заболевания и должен состояться еще до начала терапии. Но необходимо помнить о том, что гепатит B иногда тесно переплетается с гепатитом D, что может создавать дополнительные сложности при проведении такого анализа. Поэтому следует учитывать и такие варианты осложнений:

  • коинфекция – происходит заражение сразу двумя видами гепатита B и D. Такое заболевание протекает намного сложнее и болезненнее. Хронической формы у такого недуга нет, потому что в большинстве своем болезнь заканчивается летальным исходом;
  • суперинфекция – к ранее спавшему гепатиту D присоединяется острый ВГB, в этом случае болезнь перетекает в хроническую с неблагоприятным прогнозом.
Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector